驴铜蓝蛋白（CER）ELISA检测试剂盒ATOS说明书

ATOS（阿托斯）电磁阀/伺服阀/比例阀/叶片泵/柱塞泵
ATOS电磁换向阀、 ATOS减压阀、 ATOS安全阀、 ATOS控制阀本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
驴（Donkey）铜蓝蛋白（CER）
ELISA检测试剂盒
ATOS说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附ATOS（ELISA）。往预先包被铜蓝蛋白（CER）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的铜蓝蛋白（CER）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存ATOS
1.  血清：ATOS不含热原和内毒素的试管，阿托斯过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
阿托斯注意事项
1.  试剂盒保存在2-8℃，ATOS前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再ATOS。
2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白，按照说明书阿托斯时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育阿托斯。
5.  所有液体组分ATOS前充分摇匀。
试剂盒组成

名称
96孔配置
48孔配置
备注

微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无

标准品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
无

样本稀释液
6mL
3mL
无

检测抗体-HRP
10mL
5mL
无

20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
按说明书进行稀释

底物A
6mL
3mL
无

底物B
6mL
3mL
无

终止液
6mL
3mL
无

封板膜
2张
2张
无

说明书
1份
1份
无

自封袋
1个
1个
无

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、10、20、40、80、160 ng/mL
试剂的准备
 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板ATOS
1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
阿托斯步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.  待测样本孔先加样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；空白孔不加。
4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

 
试剂盒性能
1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.  灵敏度：最DI检测浓度小于1.0 ng/mL。
3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.  有效期：6个月
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验阿托斯及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十余年，是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、ATOS条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验阿托斯服务：

ELISA试剂盒免费代检测
CCK8检测
HE染色
PAS糖原染色

Western Blot
免疫组化IHC染色
荧光定量PCR
阿利新蓝染色

流式细胞检测
免疫荧光染色
激光共聚焦
动物模型服务

石蜡/冰冻切片
透射电镜服务
扫描电镜实验
蛋白双向(2-D)

蛋白双向2D-WB
免疫共沉淀
原位杂交（FIsh）
蛋白质纯化

 
探针合成

 
DNA甲基化实验

 
琼脂糖凝胶电泳

 
药理毒理动物实验
 

番红O固绿染色
明胶酶谱MMP
酶活性检测
动物造模/模型实验服务